sochaczew szpital powiatowy ad

Opowiadamy o przydatności tych postępów, umożliwiając nam nie tylko zdefiniowanie genetycznej przyczyny SCID w rodzinie z pojedynczym zaatakowanym synem, ale także przeprowadzenie prenatalnego wykluczenia SCID przez analizę sprzężeń u późniejszego płodu męskiego zagrożonego. Metody
Pacjenci i próbki limfocytów
Rysunek 1. Ryc. 1. Rodowód i analiza DNA rodziny chłopca ze sporadycznym SCID. Kręgi przedstawiają kobiety, otwarty kwadrat normalnego mężczyzny, stały kwadrat dotkniętego chłopca i P ciążę w toku. W teście Southern blot, genomowy (G) i hybrydy T-komórkowej (T1 i T2) DNA z matki i genomowego DNA z innych członków rodziny sondowano pod kątem polimorfizmów z fragmentacją restrykcyjną (RFLP). Pasy odpowiadające każdej osobie w rodowodzie pokazują allele znalezione w trzech loci: DXS14 (u góry), DXYS1 (środek) i DXS94 (u dołu). Wielkości w kilogramach pasm allelicznych dla każdego polimorfizmu pokazano po prawej stronie.
Oceniliśmy matkę i innych krewnych chłopca z SCID i brak rodzinnej historii chorób układu odpornościowego. Rodowód pokazano na ryc. 1. Matka chorego chłopca miała jedną siostrę, żadnych braci i żadnych wujków ani ciotek ze strony matki. Pacjent, który miał prawidłową aktywność enzymatyczną deaminazy adenozynowej i fosforylazy purynowej, przeszedł udany przeszczep szpiku kostnego w 1985 r. I został opisany w innym miejscu 13. Jego matka ponownie zaszła w ciążę w wieku 33 lat i poprosiła o pomoc w ustaleniu, czy płód w tym drugim Ciąża może również wpływać na SCID. Amniopunkcja była wykonywana w 14 tygodniu ciąży.
Po uzyskaniu świadomej zgody, krew obwodową uzyskano od matki i innych dorosłych członków rodziny. Linia komórek B transformowana wirusem Epsteina-Barr, uzyskana przed przeszczepem szpiku kostnego, była dostępna od chorego chłopca. Genomowy DNA przygotowano standardowymi technikami za pomocą automatycznego ekstraktora DNA (Applied Biosystems, Foster City, CA). 8, 12 Ponadto limfocyty wyizolowano z krwi matki i babki chorego chłopca.
Badania X-laktacyjne
Inaktywację X badano oddzielnie w komórkach T matki i babki. Dla każdej kobiety przygotowano szereg hybryd somatycznych zawierających aktywny chromosom X z poszczególnych komórek T, jak opisano w innym miejscu. [8] Krótko mówiąc, poliklonalne komórki T o czystości co najmniej 97% otrzymano przez hodowlę limfocytów krwi obwodowej w wielostudzienkach. płytki, najpierw z fitohemaglutyniną przez trzy dni, a następnie z ludzką interleukiną-2 przez kolejne trzy dni. Następnie limfocyty T połączono z 50% glikolem polietylenowym-1500 (Boehringer-Mannheim, Indianapolis) z komórkami RJK88, linia fibroblastów chomika z niedoborem enzymu, fosforybozylotransferazą hipoksantynową (HPRT), kodowaną w chromosomie X. Po wzroście hipoksantyny i azaseryny, w których ekspresyjny gen HPRT jest wymagany do przeżycia, jedynymi pozostałymi komórkami rosnącymi jako monowarstwy adherentne do fibroblastoidy były hybrydy z komórkami T, które zachowały aktywny ludzki chromosom X. Ponieważ takie hybrydy mają tendencję do zrzucania niepotrzebnych ludzkich chromosomów, nieaktywny ludzki chromosom X był prawie zawsze tracony
[patrz też: spiaczka cukrzycowa objawy, spiaczka cukrzycowa, wałeczki ziarniste w moczu ]