Topoizomeraza DNA II w ostrej białaczce promielocytowej związanej z leczeniem ad 5

Nukleotyd 1484 znajduje się po stronie 5 miejsca cięcia (pozycja -1), co odpowiada punktom przerwania translokacji der (15) i der (17) u czterech pacjentów z APL związanym z mitoksantronem. Panel B przedstawia zależne od DNA topoizomerazy II cięcie normalnego homologu dla punktu przerwania translokacji der (15) i der (17) RARA w APL w Pacjent 1. Substrat obejmujący pozycje od 2603 do 2871 z intronu RARA 2 (numer dostępu w GenBank AJ297538) zawierał punkty przerwania translokacji. Nukleotyd 2695 wskazuje pozycję (-1) miejsca cięcia odpowiadające punktom przerwania translacji der (15) i der (17). Ocenialiśmy cięcie mediowane topoizomerazy II normalnego homologu punktu przerwania translokacji PML in vitro przy użyciu dwuniciowego substratu DNA o 268 bp, obejmującego gorącą plamę o 8 par zasad w obecności mitoksantronu, etopozydu lub jego katechiny lub chinonu. metabolity i pod nieobecność tych środków.24 Niewielkie miejsca cięcia obserwowano przy braku leku (Figura 3A). Pasma o różnych rozmiarach i intensywnościach pokazywały, gdzie miejsca cięcia były wzmacniane przez różne czynniki (Figura 3A).
Gorąca plama 8 pz punktu przerwania translokacji w pozycjach 1482 do 1489 odpowiadała miejscu cięcia za pośrednictwem topoizomerazy II w pozycji 1484, gdzie pozycja wskazuje podstawę natychmiast 5 do cięcia (pozycja -1). Rozszczepienie w pozycji 1484 wykryto w nieobecności leku, ale było ono znacznie wzmocnione przez etopozyd, zarówno metabolity etopozydu, jak i mitoksantron. Pozycja 1484 była korzystnym miejscem cięcia przez topoizomerazę II w obecności mitoksantronu, o czym świadczy intensywność pasma cięcia (Figura 3A). Cięcie indukowane mitoksantronem zwiększało się odpowiednio o współczynnik 8,9 i 2,5 w stosunku do cięcia w tym miejscu bez leku lub w obecności etopozydu. Cięcie w wielu miejscach znacznie się zmniejszyło lub zostało wyeliminowane po podgrzaniu (Figura 3A). W przeciwieństwie do tego, indukowane mitoksantronem cięcie w pozycji 1484 pozostało wykrywalne po ogrzewaniu (Figura 3A), wskazując na stabilność kompleksów rozszczepienia. Wyniki te pokazują, że punkt przerwania translokacji intronu 6 PML 6 w APL związanym z mitoksantronem jest korzystnym i stabilnym miejscem indukcji mitoksantronu przez topoizomerazę II.
RARA Translocation Punkty przerwania w APL związanym z Mitoxantrone
Przeprowadziliśmy testy rozszczepiania topoizomerazy II in vitro na dwuniciowych substratach DNA obejmujących normalne homologi punktów przerwania translokacji RARA w Pacjentach 1, 2, 3 i 4 w celu ustalenia, czy topoizomeraza II pośredniczyła również w pękaniu w locus RARA (Figura 3B i Tabela 1). W Pacjentce (Figura 3B), cięcie za pośrednictwem topoizomerazy II obserwowano w pozycji 2695 intronu 2 RARA proksymalnie względem progów translokacji der (15) i der (17) RARA i było stabilne termicznie (Figura 3B). Punkty przerwania RARA na obu chromosomach pochodnych w próbkach od pacjentów 2, 3 i 4 również znajdowały się w pobliżu miejsc funkcjonalnego cięcia mitoantronowego indukowanego przez topoizomerazę II (tabela 1). Testy na wszystkich substratach zostały powtórzone, a powtarzane testy potwierdziły te wyniki.
Miejsca cięcia indukowanego mitoksantronem przez topoizomerazę II i t (15; 17) skrzyżowania punktów przerwania
Rysunek 4
[podobne: ginekomastia kielce, profilaktyka poekspozycyjna, hi kwas ]
[przypisy: kwas paraaminobenzoesowy, chlamydia pneumoniae leczenie, zaburzenie schizoafektywne ]